Разработка генетической конструкции, экспрессирующий ген bcla в составе генома рекомбинантного аденовирусного вектора

Тоноян Р.К., Кутузова Н.М., Крылова И.Д.

Цель работы: разработка рекомбинантного аденовирусного вектора, содержащего ген BclA.

Аденовирусные векторы являются эффективным инструментом для доставки генов в клетки млекопитающих. Данное свойство широко используется в разработке на основе аденовирусов различных рекомбинантных вакцин и генотерапевтических средств для целей ветеринарии и медицины.

Аденовирусные векторы имеют несколько существенных преимуществ перед другими векторными системами. Во-первых, из генома удалены области, ответственные за взаимодействие с клеткой, что делает вектор безопасным и практически инертным с точки зрения взаимодействия с клеткой. Во-вторых, разработано большое количество аденовирусных векторов с измененным за счет модификации структурных белков тропизмом. Такие векторы способны обеспечивать селективную доставку генетической информации в клетки различных тканей организма.

BclA – является иммунодоминантным антигеном экзоспориума B. anthracis, т.е. большинство антител, вырабатываемых против спор, взаимодействуют с антигеном BclA. Данный антиген экспрессируется с матрицы гена bclA.

С помощью методов клонирования, ПЦР, электрофореза и использования штаммов E.coli Dh5alfa и BJ518 и векторов pShuttle-out, pAL-TA и Ad-Easy была получена генетическая конструкция pAd5-EASY-BclA, содержащая ген BclA в своем составе. Таким образом, получен рекомбинантный геном аденовируса человека 5-го серотипа, с делетированными Е1 и Е3 областями, несущий ген антигена BclA, под контролем CMV-промотера.